绿色荧光蛋白标记的小鼠胚胎干细胞系的建立及向心肌细胞分化
作者:罗浩 出处:武汉大学人民医院
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目的：建立能够稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的小鼠胚胎干细胞系，并诱导其向心肌细胞分化。 方法：①通过小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养小鼠胚胎干细胞（ES－D3）。②质粒pEGFPN1脂质体复合体转染小鼠胚胎干细胞，使其稳定表达GFP。③对稳定表达GFP的干细胞系进行畸胎瘤形成检测，观察其多向分化潜能。④采用悬滴、悬浮、贴壁培养诱导GFP阳性干细胞向心肌细胞分化。⑤分化的心肌细胞鉴定：免疫荧光方法检测心肌细胞特异性标志物cTnT、α-actinin；心肌细胞特异性标志物mRNA的提取和PT－PCR。 结果：转染后干细胞经20次传代后仍然表达GFP，裸鼠皮下接种ES 细胞后均可形成畸胎瘤，在HE染色的肿瘤组织切片中可看见幼稚神经管样结构、室管膜上皮，透明软骨岛等。GFP阳性干细胞成功向心肌细胞分化。 结论：表达GFP的小鼠胚胎干细胞系成功建立，GFP标记干细胞可向心肌细胞分化。
发布人:onetwofree 发布时间:2005年9月23日
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