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内脏内胚层样END-2细胞体外诱导胚胎干细胞-分化为心肌细胞的实验研究

作者:曾彬 出处:武汉大学人民医院

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      目的:探讨内脏内胚层样END-2细胞体外诱导胚胎干细胞ESCs(Embryonic Stem Cells)分化为心肌细胞的特征。      方法:用鼠胚成纤维细胞MEF(mouse embryonic fibroblasts)作为饲养层促ESCs增殖并抑制其分化,先将ESCs悬浮培养形成2~3天前拟胚体Pre-EBs(Pre-embryoid Bodies),再和END-2细胞共培养诱导向心肌细胞分化。实验组分3组。第1,2组Pre-EBs分别和END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养。第3组Pre-EBs和表面铺有一层琼脂糖的END-2细胞共培养。自然分化为对照组。相差悬微镜下观察分化细胞的形态学变化,免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌动蛋白(Actin)及肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。    结果:各实验组均可见自发性收缩的拟胚体,随着培养的延长, 自发性收缩的拟胚体数目也增加。均表达心肌细胞特异性蛋白Actin和TnT,以及观察到心肌样超微结构。在和END-2细胞直接接触的诱导条件下,分化的细胞形态较单一。    结论:END-2细胞通过分泌可溶性细胞因子可诱导ESCs向心肌细胞分化。直接接触在END-2细胞诱导作用中并不是必要的,但可诱导出较单一的细胞。

 

发布人:onetwofree 发布时间:2005年9月23日
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