目的:研究高游离脂肪酸(FFA)血症对大鼠血管内皮细胞胰岛素信号通路(PI3K-eNOS)影响及及机理,探讨高FFA血症在代谢性综合征患者大血管病变发生发展中的作用。 方法:将6-8周SD雄性大鼠60只,重量250~300g,随机分成2组。对照组大鼠30只经颈静脉插管输入生理盐水(18ul/min)6小时,FFA组30只采用20% Intralipid(18ul/min)+ 肝素(0.72IU/min)6小时输注,升高血FFA水平2~4倍。升高血FFA水平2~4倍。输液结束后处死动物,取出胸及腹主动脉,剖开血管,用刮刀收集血管内壁表层的内皮细胞,超声匀浆,制成内皮细胞匀浆液。①Western 印迹法分别检测Akt/p-Akt473、eNOS/p-eNOS1177、ERK-1/p- ERK-1及ERK-2/p-ERK-2蛋白及磷酸化水平的表达。②半定量RT-PCR检测内皮细胞eNOSmRNA水平表达,eNOS扩增 40循环,β-actin扩增30循环,结果用eNOS带与β-actin带的光密度之比来表示。③用高效液相色谱(HPLC)测定血清NOx水平,采用紫外检测器(214nm)检测。 结果:①FFA组血浆FFA水平明显增高(FFA:1146.9±223.1vs.C: 327.3±106.5micro-mol/L,p<0.01),而血清NOx水平明显降低(FFA:12.6±1.9 vs.C:17.2±3.9 micro-mol/L,p < 0.01).②FFA组eNOSmRNA水平,eNOS/β-actin比值明显低于对照组(FFA:1.42±0.23,C:2.12±0.35,P<0.05)。③与对照组相比,FFA组p-A