目的 比较2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠和正常大鼠骨骼肌组织基因谱表达的差异,探讨胰岛素抵抗(IR)的发病机制。
方法 (1)SD雄性大鼠12只随机分两组,一组10只,为正常对照组,另一组12只, 为实验组 。实验组大鼠在空腹12h后按25mg/kg体重腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ), 对照组大鼠腹腔注射相同体积的0.1mol/L(PH值4.4)枸橼酸缓冲液,2周后实验组喂以高 脂 饲料(蛋白11.3%、脂肪42.6%、胆固醇1%、碳水化合物45.1%),对照组喂以基础饲料, 持续喂养10周。实验结束前1周作糖耐量实验,实验结束时,取血测甘油三酯、胰岛素及血糖 ,以糖耐量明显异常、甘油三酯明显升高及胰岛素敏感指数明显异常,表明模型建立成功; (2)用改良一步法分别抽提两组大鼠骨骼肌组织总RNA,用Oligotex mRNA Midi Kit(Quag en公司)分离纯化总RNA为mRNA。参照Schena等的方法逆转录标记探针并纯化,用Cy5-dUTP 标记2型糖尿病大鼠骨骼肌组织mRNA,用Cy3-dUTP标记正常对照组大鼠骨骼肌组织,获得两组动物来源的cDNA探针;(3)将cDNA探针与BiostarR40s基因芯片(上海博星基因芯片有限公司)杂交,用General Scanning公司的ScanArray5000扫描芯片,用ImaGene3.0软件分析 Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值。有效基因的Cy3和Cy5值两者皆大于200或其一大于800 ,基因差异表达的标准是其比率(Cy5/Cy3)大于2.0或小于0.5。
结果 (1)两组动物差异
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