肥胖症患者脂肪组织蛋白表达谱差异分析及cathepsin K功能初步研究

作者:尹晓 出处:上海市内分泌研究所

  目的：自1994年Ob 基因及瘦素的发现人们就认识到脂肪组织在人体能量代谢的调节中起着重要作用，成为肥胖症及肥胖相关代谢异常方面研究的热点。本研究的目的就是筛选肥胖症患者和正常对照者脂肪组织蛋白表达谱的差异，并对某些差异表达的蛋白做初步的功能研究，希望能进一步明确肥胖症的病因，为其治疗提供靶点。  方法：将双向电泳分离技术应用于肥胖和非肥胖个体的脂肪组织，双向电泳分离后硝酸银染色得到的凝胶图用于PDquest软件分析。将分析后得到的表达有差异的蛋白点进行MALDI-TOF-MS分析，确认蛋白种类。然后进一步扩大样本量(肥胖组19例、非肥胖对照组18例)，利用半定量RT-PCR、western－blot进一步验证上述确认的蛋白在肥胖患者和正常人脂肪组织表达水平的差异。最后培养3T3-L1细胞株并诱导分化为成熟脂肪细胞，通过半定量RT-PCR和Western－blot观察在细胞分化不同阶段ctsk mRNA及蛋白表达情况。  结果：PDquest软件分析结果显示两组图谱均有600个左右蛋白点，灰度差异两倍以上的点有35个，我们选择有显著性差异的十个点用于质谱分析。MALDI－TOF-MS分析确认了包括ctsk在内的七个蛋白点的蛋白种类。半定量RT-PCR、western－blot的结果进一步证实了肥胖患者和正常人脂肪组织表达的ctsk在mRNA和蛋白水平均有差异。细胞培养结果发现在脂肪细胞分化过程中ctsk及蛋白表达量逐渐增加。  讨论：本研究利用双向电泳和质谱分析技术筛选肥胖患者和非肥胖对照者脂肪组织蛋白表达的差异，这几种差异表达的蛋白质可能在肥胖的发生、发展中起一定的作用。其中对cathepsin K进行了进一步的研究，ctsk是一

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