人胚胎胰腺组织来源的Nestin阳性细胞的体外扩增与诱导分化
作者:洪天配 出处:北京大学第三医院内分泌科北京大学干细胞研究中心
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目的 从人胚胎胰腺组织中分离Nestin阳性细胞，进而研究该细胞的体外扩增 和定向诱导分化的能力。 方法 采用胶原酶消化法，从人胚胎胰腺组织中分离获得胰岛样细胞簇（islet -like cell clusters，ICCs），ICCs经手工挑拣后重新接种，待形成单层上皮样细胞后，进行传代培 养和诱导分化。利用逆转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫荧光染色、流式细胞分析及放 射免疫分析（RIA）等方法，检测该细胞中分子标志物的表达，并对其向胰岛内分泌细胞分 化的能力进行鉴定。 结果 （1）上述单层上皮样细胞具有很强的增殖能力，可连续传代至少16代 ；（2）RT-PCR 、免疫荧光染色、流式细胞分析显示，该细胞可表达干细胞的标志分子Nestin和ABCG2；（3 ）流式细胞分析显示，该Nestin阳性细胞可表达CD44、CD90、CD147，但不表达CD34、CD38 、CD45、CD71、CD117、CD133、HLA-DR，这与骨髓来源的间充质干细胞的表型特征相似；（ 4）RT-PCR分析显示，在多种细胞因子和无血清的条件下，Nestin阳性细胞经诱导后可出现 胰岛素、胰升糖素和胰十二指肠同源盒基因-1（PDX-1）mRNA的表达，而Nestin和Neurogeni n3（Ngn3）mRNA表达消失。RIA分析也可检测到诱导后的细胞内有胰岛素产生。 结论 从人胚胎胰腺中分离得到的Nestin阳性细胞，具有胰腺前体细胞的特性 ，在体外具有 很强的增殖能力，并可诱导分化为胰岛内分泌
发布人:onetwofree 发布时间:2005年2月5日
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