盐酸贝尼地平对肾微小血管扩张效果的研究

随着近年来新的钙拮抗剂相继开发，有报道称，同时扩张出入球小动脉，从对肾血行动态和肾保护的角度来看，推测这类药物有更好的作用。钙拮抗剂对肾的作用从肾保护方面来看，是一个非常重要的问题。

本研究的目的是明确贝尼地平对肾出入球小动脉的扩张作用，使用患有水肾症的模型使肾微小循环变得直接可视，针对该部位进行研究。

1.       对象和方法

将6周龄的Wistar大鼠右侧输尿管麻醉结扎，做成水肾病模型。6周开始到8周后，由于输尿管的萎缩，能够在显微镜下直接观察到肾微小循环的时候，将插管插入右侧肾动脉，用含有D-果糖（5mM）、牛血清蛋白（7.5%）、各种氨基酸的缓冲液（PH7.4）持续灌注，同时摘除肾脏。回流液在37℃下保温，将摘除的肾脏倒立地固定在显微镜台上，观察肾微小循环。肾动脉压通过插管的一段测定，为了防止伴有血管收缩的肾灌流压的变化，用血压调解装置维持液体潴留槽中内压在80mmHg,从而保持肾的灌流压。

肾微小循环的评价采用装有CCD照相机的可视显微镜观察肾脏，将影像录入照相装置第二天导入计算机，定时计算测定肾小球出入球小动脉。通过导入的图像上血管壁的直线评价血管径，将5-10μm幅度下的像素浓度平均后，将最大浓度当成血管壁，将两者的间隔作为血管径计算出来。

首先给与ARB（3nM）对肾微小血管进行灌注，提高血管插管高度。不断给与灌注液中最终浓度为10^-8、10^-7、10^-6的贝尼地平，研究出入球小动脉的扩张反应。

[统计]

结果全部用平均值±标准差表示。用分散分析法进行统计处理，有统计学差异的情况下各组间的检定采用费希尔多重比较法。认为在0.05以下的危险率由统计学差异。

2.结果

肾灌注液中给与的ARB能显著扩张肾入球小动脉（由13.3±1.8到8.8±1.8μm,n=6,p<0.05）,出球小动脉（由11.3±1.1到8.2±0.9μm,n=8,p<0.05）。图1

由于在升高血管插管的情况下给与了贝尼地平，研究其是否有扩张出入球小动脉的作用。对于入球小动脉，贝尼地平显示了明显地扩张作用。表现为10^-8M的贝尼地平将出球小动脉扩张到9.9±1.8μm，之后，随着贝尼地平浓度的上升显示了浓度依存性的扩张作用。10^-6M的贝尼地平将入球小动脉扩张到12.4±2.1μm( p<0.05)，也观察到对出球小动脉的扩张作用。10^-8M的贝尼地平出球小动脉由8.2±0.9增加到8.4±0.9μm,10^-6M增加到10.1±1.0μm。

图2显示的是贝尼地平将ARB引起收缩的血管径回复的比率。10^-7M和10^-6M的贝尼地平分别使出球小动脉扩张63±6%，80±8%。出球小动脉弱于入球小动脉的扩张反应（P<0.05），与传统的钙拮抗剂在10^-7M和10^-6M下所显示的22±8%、49±11%的扩张率不同。

考察

钙拮抗剂从其分子构造和药理学构造来看，有维拉帕米和地尔硫卓代表的非二氢吡啶类，和尼群地平、贝尼地平代表的二氢吡啶类。近年来，长期给与钙拮抗剂而引起的脏器保护作用正被研究，各种钙拮抗剂的脏器保护作用也是不同的。

传统的钙拮抗剂对肾微小循环的作用主要是扩张入球小动脉。但是，根据近年来的研究，在钙拮抗剂中，也有扩张出球小动脉的。以硝苯地平和尼卡地平为代表的第一代钙拮抗剂，主要扩张入球小动脉。而近年开发的依福地平可同等程度地扩张出入球小动脉。本研究中，贝尼地平也显示了对出入球小动脉的扩张作用。关于出球小动脉的扩张，贝尼地平可以使肾小球滤过率降低，这个结果与动物实验是一致的。

在药理学方面，钙拮抗剂的作用部位为电位依存性钙通道，与出球小动脉比较，入球小动脉上的活性更高，关于钙拮抗剂对入球小动脉有很强的扩张作用已被证明。但是，钙拮抗剂引起的出球小动脉的扩张作用，与其说是该药物的固有性质，不如说是药物与组织的亲和性不同而导致的对钙通道阻滞作用之外的作用。一直以来，认为钙拮抗剂能增加肾小球滤过率、肾血流量、滤过系数，但应该考虑从肾脏作用的机制方面进行新的分类。

因为对肾小球前后血管的扩张使肾小球内压下降，因此期待由肾小球高压引起的肾小球硬化的抑制作用。近年，具有同等程度扩张出入球小动脉作用的依福地平在动物实验中发现，其有与ACEI同等程度的肾保护作用。这次，我们针对出球小动脉的扩张作用，报道了贝尼地平的肾保护作用。二藤等人用易发脑卒中的原发性高血压大鼠，金泽等人用摘除了肾脏5/6的原发性高血压大鼠，观察尿蛋白减少和血中尿素氮、血清肌酐值。而且，Shirakura等人也使用PAN（puromycin aminonucleoside）和PS（protaminesulfate）的肾小球硬化模型，报告了对硬化进行的抑制作用。该项研究中报道了摘除肾后对出球小动脉的作用，作为肾小球内压指标的proximal stop-flow pressure在使用氨氯地平后是上升的，而用贝尼地平后，该指标基本不变（Kawata等报告），菊糖清除率、PAH清除率上升，与滤过系数下降的Kusaka等人的报告一致，活体内也发现了贝尼地平引起出球小动脉扩张的同样的肾保护作用。动物实验中已发现贝尼地平具有肾保护作用，在长期的临床研究中也获得了良好的临床成绩，没有发现肌苷清除率的上升。

钙拮抗剂是否能改善肾功能的长期预后，关于其作用机制，现在正成为议论的焦点。短效的二氢吡啶类钙拮抗剂不能抑制肾功能障碍的进展，有报道称肾循环动态的急剧变化会促进肾功能的恶化。钙拮抗剂不仅引起全身血行动态、肾小球血行动态，抑制游离基的生成，抑制系膜蛋白的输送等，也会直接在细胞水平上发挥保护作用。以上也是贝尼地平发挥的肾保护作用的原因，Dohi等人发现，原发性高血压大鼠的ACH（乙酰胆碱）的反应性较低，但贝尼地平却可以改善NO引起的血管扩张反应，以补充这种不完全的扩张。 在讨论各种钙拮抗剂的场合下，考虑以上各点，我们认为贝尼地平对肾小球前后血管的扩张是其肾保护的原因之一。

总结

该研究中显示了贝尼地平可同时扩张肾小球的出入球小动脉。贝尼地平与以往的钙拮抗剂相比，显示了很强的降压作用，而长时间的作用下对代谢的影响却非常少。根据对肾微小循环作用的研究，从肾保护的观点证明了贝尼地平的有用性。

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