盐酸贝尼地平对自发性高血压大鼠踝部体积的影响------

  摘         要

为了预测盐酸贝尼地平（以下简称贝尼地平）引起浮肿的程度，我们研究了贝尼地平对自发性高血压大鼠（以下简称SHR）踝部体积的影响。结果显示了具有同等降压作用的贝尼地平5，10mg/kg，以及苯磺酸氨氯地平（以下简称氨氯地平）5，10mg/kg的单次经口给药未见引起浮肿，并且对角叉菜胶引起的踝部肿胀也未见影响。然而，在一天一次反复经口给药4周的试验中，可见氨氯地平 5，10mg/kg给药第7天开始出现了有意义的踝部体积增加，而贝尼地平 10mg/kg在给药第14天以后，5mg/kg在第28天才观察到了显著的增加。试验的结论，反复给药的情况下，显示了氨氯地平引起踝部肿胀，而贝尼地平只出现了较轻的反应。 

Ⅰ 序   言

二氢吡啶类的钙（Ca）拮抗剂在高血压与心绞痛等循环系统疾病中应用广泛，药物的有效性也得到了广泛证实。贝尼地平（可力洛）是本公司首次合成的1，4-二氢吡啶诱导体，是一种持续型的Ca拮抗剂^1）。贝尼地平起效缓慢，所以它的特点是在高血压患者降压的同时很少出现心率改变^2）。最近，出现了几种降压起效缓慢，药效持续的药物，氨氯地平便是其中之一。

二氢吡啶类Ca拮抗剂的副作用多来自于它的药理作用，多见由于血管扩张作用引起的颜面潮红，头重，头痛，烘热感等^3）。另外，踝部浮肿等末梢浮肿是血管扩张药的特征性的副作用，可能是由于局部血管扩张引起毛细血管通透性的变化而致。Kubota^4）等报告了长效型的氨氯地平随着给药时间的延长发生浮肿的几率增高。有报告称氨氯地平浮肿发生的比率是6-17%^4）-7）。贝尼地平引起的浮肿非常少见，6年的使用结果显示发生比率仅为0．05%^8）。

本次，为了验证贝尼地平引起浮肿的程度，实施了贝尼地平反复给药对SHR踝部体积影响作用的实验。对照组用药为氨氯地平.

Ⅱ 试验材料以及方法

1，  试验动物

本试验使用了自发性高血压大鼠（SHR/NCrj，雄性）。买入时，大鼠为13周龄（体重273~372g），预备养育后，在15周龄（反复给药试验）或者18周龄（单次给药试验）时开始试验。动物养育在恒温（22~24℃），恒湿（50~60%），每天日照12小时（7：00~19：00）的房间，可以自由摄取固体饲料和饮料水，两只/箱。

2，  药物以及配制方法

各种药物的悬液使用了methylcellulose cp 400（和光纯药，大阪）用注射用水（大冢制药，东京），调制成的0．5%（W/V）溶液（0．5% methylcellulose溶液）。盐酸贝尼地平（协和发酵）与苯磺酸氨氯地平〔从氨氯地平片（住友制药）中抽取氨氯地平，变换成苯磺酸盐〕在避光条件下溶于0．5%methylcellulose 400溶液中，按照每100g体重1mL的比例经口给药。对照组只给0．5%methylcellulose 400溶液。

虽然贝尼地平与氨氯地平均在3mg/kg（p.o.）剂量下出现对SHR的显著的降压作用^1）9）。但是本试验从检验副作用的观点出发，将剂量设定为5，10mg/kg。

3，  血压，心率的测定以及分组

在39℃，保温10分钟以上，使用非观血血压测定装置（Multi Channel Sphygmomanometer， PS-600，Riken Kaihatsu，东京）测量了收缩期血压与心率。首先测量2次，使大鼠适应血压与心率的测量，第3次测得的血压与心率值作为给药前值。收缩期血压超过180mmHg的大鼠用于试验，分组时保证组间血压无差异。

4，  单次给药时对角叉菜胶诱发踝部肿胀的作用

18周龄的大鼠（体重316~356g）经口给药24小时后，使用大鼠后肢浮肿体积测定装置测量了大鼠右后肢体积。给大鼠右后肢踝部注射0．1mL用生理盐水（大冢制药，东京）溶解的0．5%（W/V）λ-carrageenin（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA）溶液，诱发炎症后3小时再次测量右后肢体积。

5，  反复给药时对踝部体积的作用

反复经口给药开始日（大鼠体重284~339g，15周龄）作为day0，最终给药（day27）的给药前，给药3小时后，给药24小时后分别测量了血压与心率。反复给药开始前，给药开始后第4，7，11，14，18，21天的给药前，以及最终给药24小时后（day28）分别使用大鼠后肢踝部体积测定装置测量了两后肢踝部体积。同时肉眼观察了四肢皮肤的变化。

Ⅲ 统 计 分 析

统计处理使用了统计解析软件The SAS system for Windows ver. 6. 12（CD No.442994， SAS Institute Inc., USA）。多重比较检定时，通过Bartlett检定有意时，使用Kruskal-Wallis鉴定，无差异时，使用一元配置分散分析（ANOVA）进行检定。Kruskal-Wallis检定有差异时，使用Steel或者Steel-Dwass进行检定，ANOVA分析有差异时，使用Dunnett或者Tukey进行检定。P<0.05时，判定为有差异。结果使用平均值±标准误差表示。 

Ⅳ 结   果

1，  单次给药时贝尼地平与氨氯地平对血压以及心率的作用

给药3小时后，贝尼地平5，10mg/kg组与氨氯地平5，10mg/kg组，与给药前相比均出现显著的血压下降。各给药组心率均出现有意义增加。给药24小时后，各组于给药3小时后所见的血压与心率的有意义变化均消失，各指标恢复到给药前水平（Table 1）。

2，  单次给药时贝尼地平与氨氯地平对角叉菜胶诱发的足踝肿胀的作用

给与试验用药24小时后，测量后肢体积，与只给与溶液注射组比较未见有意义改变。给与角叉菜胶3小时后，给与溶液注射组出现了78.5±5.8%的右后肢踝部肿胀。各给药组均未见对这种肿胀的药物影响（Table 2）。

3，  反复给药时与氨氯地平对血压以及心率的作用

经过27天的给药，给药第27天的给药前后血压与心率的变化如Table 3所示。各给药组第27天最终给药前的血压与反复给药开始前的血压相比未见有意差。贝尼地平 10mg/kg组与 氨氯地平5，10mg/kg组可见心率的有意义减少。给药3小时后，各给药组均见血压的有意降低，贝尼地平10mg/kg组与氨氯地平 5，10mg/kg组可见心率有意增加。给药24小时后各给药组的血压以及心率均恢复到给药前水平。据此可见，贝尼地平与氨氯地平 5，10mg/kg均表现出同等的降压作用活性与持续性。

4，  反复给药时贝尼地平与氨氯地平对踝部体积的作用

给药前，给药第4，7，11，14，18，21，28天的大鼠后肢体积如Table 4所示。贝尼地平5mg/kg组只在第28天，10mg/kg组在第14天，第18天，以及第28天出现了与注射溶液组相比有意义的踝部体积增加。而氨氯地平 5mg/kg组第7天，第14天，第18天，第28天，10mg/kg组在第7天，第18天，第21，28天均出现了有意义的增加。

在氨氯地平 10mg/kg组10只大鼠中有2只肉眼可见后肢皮肤的轻度发红，其它的各给药组未见有变化。

Ⅴ 考    察

在临床上，有报告指出氨氯地平引起浮肿的频率很高^4）~7）。而贝尼地平引起浮肿很少见^8）。因此为了研究这个临床结果是否能在动物模型上再现，使用两种药物进行了比较。

本试验研究了经口反复给贝尼地平与氨氯地平 5，10mg/kg四周对SHR踝部体积的影响。给与氨氯地平 5mg/kg以及10mg/kg时，从给药第7天即开始连续出现了有意义的踝部体积的增加，而贝尼地平10mg/kg给药时分别于给药第14天，以及第18天比较晚的时间，5mg/kg只在第28天才观察到有意义的增加。这个试验的结果显示了贝尼地平与氨氯地平虽然同是具有同等持续效果的1，4-二氢吡啶类Ca拮抗剂，但是，贝尼地平与氨氯地平相比引起浮肿的结果却明显减弱，这个结果与贝尼地平引起浮肿少见的临床结果一致。

Taherzadeh等^10）报告了给大鼠单次皮下注射地尔硫卓不仅从毛细血管而且从细静脉也可见色素渗出增加。细静脉的渗出亢进与炎症性浮肿相关，显示了地尔硫卓可以诱发炎症。本试验研究了单次给与贝尼地平与氨氯地平对角叉菜胶诱发踝部肿胀的影响，两种药物均未见影响。因此可以得出结论，两种药物没有诱发炎症的作用。所以反复给与两种药物所见的踝部体积增加不是在炎症基础上。

有些种类的Ca拮抗剂可以诱发末梢浮肿（主要是足关节浮肿），有报告指出原因可能是细小动脉的扩张引起细小动脉抵抗与细小静脉抵抗比的低下，或者是纠正这种低下的肌原性调节作用受到抑制^11）。有报告指出贝尼地平除了扩张细小动脉以外还有扩张细小静脉的作用^12）。细小静脉的扩张可能不出现细小动脉抵抗与细小静脉抵抗比的低下，或者只出现轻度低下，所以不易发生浮肿。

毛细血管内皮的损伤使微血管透过性亢进，也是浮肿的一个原因^13）。关于SHR血管内皮损伤引起透过性亢进^14）以及内皮机能改变^15）已经有报告指出。贝尼地平可以改善乙酰胆碱对SHR离体肾动脉舒张作用的减弱^15），并且对柠檬酸钠^16）以及维生素D₂·尼古丁诱发的血管内皮损伤也有保护作用。因为贝尼地平有内皮保护功能，所以可能因此减轻了由于内皮损伤引起的浮肿。

SHR的内皮损伤也可能与过氧化物有关。有报告指出SHR血管壁的过氧基升高^18），而易患脑血管病的自发性高血压大鼠（SHRSP）的肠系膜细动脉^19）以及内皮细胞^20）的一氧化氮释放的减少随着过氧基的消失而恢复。使用脑组织匀浆的自动氧化试验可见贝尼地平可抑制脑的自动氧化（吉竹等，未发表），显示可能有抑制过氧化物产生作用。这个作用可能与贝尼地平的内皮保护作用机制有关。

Ⅵ 结    论

通过本试验观察到了，对SHR反复给药时，氨氯地平引起了踝部肿胀，而贝尼地平只出现了轻微的反应。本次的SHR试验结果与临床使用贝尼地平很少见患者浮肿的结果一致。贝尼地平很少引起浮肿的原因可能与它的扩张细小静脉，内皮保护作用有关。

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